大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（SD大鼠）

实验材料准备

选择2周龄或体重约200克的SD大鼠作为实验对象。准备必要的灭菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪和磁珠等。此外，需要准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠。消毒使用75%乙醇，保持无菌环境。同时，准备预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛及无菌培养瓶等。培养基的选择为SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基，以确保细胞生长环境的优越性。

实验操作步骤

在超净工作台上，首先对所需物品进行紫外消毒30分钟。接着配制0.1%Ⅰ型胶原酶约5mL，并进行过滤除菌处理。将大鼠进行颈椎脱离后，将其放入75%酒精中浸泡2-3分钟，然后将其固定在泡沫板上。在腹股沟区剪开皮肤以暴露出脂肪组织，仔细剪取脂肪组织，置入PBS中，以避免损伤血管。随后，用PBS对脂肪组织进行清洗，剔除多余的血管和淋巴结。将脂肪组织剪切至适宜大小（约2mm×2mm），加入胶原酶进行37℃下的消化，每隔5分钟轻轻震荡一次或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管，进行离心处理，弃去上层脂滴泡沫和上清液，并用培养基重悬沉淀。最后，对细胞悬液进行过滤，再次离心后弃上清，用培养基进行重悬，并接种至培养瓶中，放入37℃、含5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在实验过程中，务必保持无菌操作，以避免细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗需要格外细致，确保不损伤细胞或带入杂质。在消化过程中，应严格控制消化时间和温度，以防止过度消化导致细胞损伤。离心和过滤操作需轻柔进行，以避免细胞损失或破裂。尊龙凯时品牌致力于提供最优质的实验材料和设备，为您的生物医疗研究提供强有力的支持。